PCR试剂盒检测步骤

　　禽轮状病毒A组RT-PCR试剂盒产品特性：高特异性：本产品采用热启动DNA聚合酶，90℃以上2min后具有扩增活性，可大大提高PCR产物的特异性。灵敏度：本产品包含的优化的缓冲液可检测低拷贝数的模板，且重复性好。高适用性：本产品可适用于任意荧光定量PCR仪。
检测步骤：
一、试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCRMIX)、酶混合物(EnzymesMIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂每个反应加入的量N个反应加入的量
荧光PCR反应液14µLN×14µL
酶混合物1µLN×1µL
总量15µLN×15µL
（1）计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环50℃for2min
预变性1循环95℃for10min
PCR扩增40循环95℃for15sec
60℃for60sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
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